Jornal de pesquisa e terapia com células-tronco

Abstrato

Dgcr8 é indispensável para a especificação de linhagem cardíaca em células estaminais embrionárias

Zhiyong Lei, Alain van Mil, Annebel M van de Vrugt, Pieter A Doevendans e Joost PG Sluijter

Objectivo: foi demonstrado que os microRNAs desempenham papéis importantes no comportamento celular e na especificação da linhagem, incluindo a diferenciação cardiogénica. No entanto, a compreensão completa dos seus papéis na diferenciação dos cardiomiócitos tem sido impedida devido à falta de um modelo celular adequado. Aqui, utilizámos uma célula estaminal embrionária (ESC) que não possui o importante microprocessador Dgcr8 (ou Pasha), que permite a introdução de miRNAs individuais para estudar o seu papel na diferenciação cardíaca e para uma seleção de alvos mais precisa.
Métodos: O ESC Dgcr8 KO foi cultivado em meio ESC suplementado com LIF com alimentadores de fibroblastos embrionários de ratinho e a diferenciação cardíaca foi induzida utilizando um protocolo de diferenciação baseado no corpo embrionário. A diferenciação foi monitorizada através da medição dos níveis de mRNA e proteína dos marcadores cardiogénicos e das alterações da heterocromatina através de coloração imunofluorescente e PCR semiquantitativa.
Resultados e conclusão: Mostrámos que os ESCs Dgcr8 KO não possuem realmente uma grande população de pequenos RNAs, incluindo, mas não se limitando a microRNAs maduros. As células KO apresentaram uma menor taxa de proliferação e foram incapazes de se diferenciar na linhagem cardíaca. Para nossa surpresa, para além de um defeito no processamento de microRNAs, as células estaminais embrionárias Dgcr8 KO são incapazes de formar heterocromatina adequada e de inativar elementos repetitivos centroméricos genotóxicos. Os nossos resultados argumentam que, para além de controlar o processamento de microRNAs, o Dgcr8 pode desempenhar um papel anteriormente não reconhecido no silenciamento da heterocromatina.