Jornal de Patologia Vegetal e Microbiologia

Abstrato

Desenvolvimento de protocolos quantitativos de reação em cadeia da polimerase em tempo real para detecção e diferenciação rápida de Xylella fastidiosa subsp. fastidiosa e Xylella fastidiosa subsp. multiplex

Brittany Pierce, Lisa Morano e Blake Bextine

Xylella fastidiosa é uma bactéria gram-negativa, limitada ao xilema, patogênica de plantas, que é transmitida entre hospedeiros pelo cigarrinha-de-asa-vítrea (Homalodisca vitripennis). Várias subespécies de X. fastidiosa ocorrem, exibindo algum grau de especificidade do hospedeiro. X. fastidiosa subsp. fastidiosa é o agente causal da doença de Pierce da videira. X. fastidiosa subsp. multiplex e X. fastidiosa subsp. sandyi são comumente encontradas na América do Norte, mas não causam a doença de Pierce. Diagnósticos rápidos para determinar a presença de X. fastidiosa e diferenciação dessas subespécies são necessários para o manejo e prevenção eficazes da doença de Pierce. Neste estudo, três métodos para distinguir subespécies de X. fastidiosa usando Reação em Cadeia da Polimerase Quantitativa em Tempo Real foram comparados. Análises de curva de fusão SYBR ® green, Eva Green ® e Takara SYBR Green ® de amplicons parciais de gyraseB, amplicons do gene zot1 e cinco amplicons tonB foram avaliadas quanto à consistência e qualidade. Protocolos de diagnóstico baseados em sondas de hibridização TaqMan ® e Molecular Beacon ® foram desenvolvidos com ênfase em uma inserção multiplex de X. fastidiosa subsp. no gene zot1. Descobrimos que os protocolos de diagnóstico baseados em SYBR ® Green e TaqMan ® não forneceram a resolução necessária para diferenciação precisa e consistente de subespécies X. fastidiosa. Os protocolos de diagnóstico que desenvolvemos utilizando a sonda Molecular Beacon ® permitem diferenciação altamente específica e confiável de subespécies X. fastidiosa, mesmo em casos em que as subespécies foram misturadas em solução. Esses novos métodos fornecem um protocolo mais confiável pelo qual as subespécies de X. fastidiosa podem ser rapidamente identificadas para fins de estudo laboratorial e diagnóstico de amostras.