Jornal de Patologia Vegetal e Microbiologia

Abstrato

Desenvolvimento de método molecular para detecção específica de espécies de begomovírus causadoras de enrolamento de folhas de tomateiro nas Filipinas

Jeremy Roy Augusto I Gomez*

O tomate é uma das culturas vegetais mais importantes devido ao seu valor econômico e nutricional, mas devido a uma doença causada por um Begomovirus , a produção de tomate diminuiu ao longo dos anos. Begomovirus que causam enrolamento amarelo da folha do tomate ou enrolamento da folha do tomate afetam a produção de tomate em muitas áreas tropicais e subtropicais do mundo. A detecção limitada desses vírus vegetais os tornou muito difíceis de detectar e controlar. O estudo visa desenvolver um método baseado em moléculas para detecção específica de ToLCPV e ToLCCeV. Isso foi feito por: 1) Validação se os primers publicados poderiam se ligar a uma espécie específica de Begomovirus usando alinhamento de sequência múltipla, 2) Projetando primers para detecção específica de ToLCPV ou ToLCCeV e otimizados por PCR, 3) Validando o primer projetado para detecção específica de ToLCPV e ToLCCeV usando amostras coletadas em campo, 4) Para identificar o padrão RFLP usando DNA do genoma completo in silico . Os primers publicados foram capazes de se anelar a cepas de ToLCPV e espécies de ToLCCeV e ToLCMiV e, portanto, esses primers precisam ser validados em um experimento real para determinar sua especificidade. Os primers ToLCPV19 e ToLCCeV19 foram projetados para detectar especificamente espécies de ToLCPV e ToLCCeV, respectivamente, e a PCR foi otimizada para diferentes temperaturas de anelamento: 53℃, 55℃ e 57℃. Amplicons de ~ 200 bp foram observados em amostras de tomate infectadas com ToLCPV e também em amostras de tomate infectadas com ToLCCeV ao usar os primers ToLCPV19 e ToLCCeV19. Além disso, não houve diferença no tamanho da banda e na intensidade das bandas em diferentes temperaturas de anelamento. A validação dos primers projetados foi feita, mas para apenas algumas amostras de tomate selecionadas e, portanto, uma validação adicional deve ser feita para determinar a especificidade dos primers projetados. A análise de RFLP mostrou que a enzima de restrição EcoRI conseguiu distinguir ToLCPV, ToLCCeV e ToLCMiV, pois produziu diferentes números de bandas por espécie de Begomovirus .