Jornal de Patologia Vegetal e Microbiologia

Abstrato

Desenvolvimento de ensaio de amplificação isotérmica mediada por loop colorimétrico para detecção rápida do vírus do enrolamento amarelo da folha do tomateiro

Mohammad Amin Almasi, Mehdi Aghapour Ojaghkandi, Ahmad Hemmatabadi, Fatah Hamidi e Saeedeh Aghaei

O ensaio de amplificação isotérmica mediada por loop (LAMP) é uma nova técnica para amplificar DNA sob temperatura constante, com alta especificidade, sensibilidade, rapidez e eficiência. Aplicamos um protocolo de detecção rápida, pela primeira vez, que utiliza amplificação isotérmica mediada por loop colorimétrica para detecção do vírus Tomato Yellow Leaf Curl. A este respeito, todos os quatro primers LAMP (ou seja, F3, B3, FIP e BIP), juntamente com os primers PCR (F e R) foram projetados com base no gene SF das sequências de DNA de TYLCV. Embora os ensaios DAS-ELISA, PCR e LAMP pudessem detectar com sucesso amostras infectadas positivas, considerando o tempo, a segurança, a sensibilidade, o custo e a simplicidade, o último foi superior no geral. Enquanto isso, entre cinco corantes visuais diferentes para detectar com precisão os produtos LAMP, tanto o azul de hidroxinaftol quanto o GeneFinderTM poderiam produzir mudança de cor e brilho estáveis ​​e longos em uma abordagem baseada em tubo fechado para evitar o risco de contaminação cruzada, concluídos eventualmente como os melhores. Todos os resultados, em geral, indicaram que o LAMP oferece um formato de ensaio interessante, novo e conveniente para uma
ferramenta de diagnóstico rápida, sensível, econômica e bastante fácil de usar para o reconhecimento do vírus Tomato Yellow Leaf Curl e, portanto, apresenta uma alternativa aos ensaios baseados em PCR.