Jornal de Patologia Vegetal e Microbiologia

Abstrato

Desenvolvimento e aplicação de ensaio de amplificação isotérmica mediada por loop para detecção rápida de Fusarium Oxysporum f. Sp. lycopersici

Mohammad Amin Almasi, Seyed Mohammad Hosseini Dehabadi, Aboubakr Moradi, Zahra Eftekhari, Mehdi Aghapour Ojaghkandi e Saeedeh Aghaei

Um protocolo confiável e rápido de detecção de patógenos, pela primeira vez, que utiliza amplificação isotérmica mediada por loop colorimétrico (LAMP) foi desenvolvido para detecção de Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici. A este respeito, todos os seis primers LAMP (ou seja, F3, B3, FIP, BIP, LF e LB), juntamente com os primers PCR (F e R) foram projetados com base no gene 28s do RNA ribossômico (número de acesso do GenBank: HM057281.1) do genoma dos fungos. Embora os ensaios PCR e LAMP pudessem detectar com sucesso amostras infectadas positivas, considerando o tempo, a segurança, o custo e a simplicidade, o último foi superior no geral. Além disso, os resultados demonstraram que o ensaio LAMP foi 100 vezes mais sensível e 4 vezes mais rápido em comparação com a PCR. Curiosamente, a reação LAMP pôde detectar com sucesso Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici sem purificação de DNA (LAMP direto). Enquanto isso, entre seis corantes visuais usados ​​para detectar produtos LAMP, o azul de hidroxinaftol, GeneFinderTM e SYBR Green I poderiam produzir mudança de cor e brilho estáveis ​​e longos em uma abordagem baseada em tubo fechado, para evitar risco de contaminação cruzada. No geral, como o LAMP é sensível, econômico, bastante amigável ao usuário e também pode gerar resultados mais precisos do que procedimentos diagnósticos anteriores, como métodos sorológicos, PCR e outros métodos moleculares, propomos este ensaio colorimétrico como um sistema de reconhecimento de fungos alternativo altamente confiável em relação ao reconhecimento de Fusarium oxysporum f. sp. lycopersici e provavelmente outras doenças baseadas em fungos.