Farmacologia Cardiovascular: Acesso Aberto

Abstrato

Detecção de células endoteliais circulantes inflamatórias utilizando células endoteliais da veia umbilical humana separadas das placas de cultura pelo factor de necrose tumoral alfa como células de controlo

Junpei Tochikubo, Naoyuki Matsuda, Yoshimi Ota, Tomoko Higashi, Yudai Takatani, Masato Inaba, Yushi Adachi e Norihiko Shiiya

Enquadramento: A síndrome da resposta inflamatória sistemática (SIRS) com coagulação intravascular disseminada (DIC) é uma perturbação grave em doentes críticos e intimamente relacionada com a progressão da lesão endotelial vascular. O diagnóstico precoce é necessário para prevenir a progressão da disfunção orgânica. As células endoteliais circulantes (CECs) podem aumentar na lesão endotelial vascular e desempenhar um papel importante no diagnóstico de DIC. No entanto, o método de deteção CEC não foi padronizado. Este estudo teve como objetivo estabelecer um método para a deteção de CEC em ambiente de cuidados intensivos. Utilizámos células endoteliais da veia umbilical humana (HUVECs) separadas das placas de cultura pelo fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) como células controlo para as CECs.
Métodos: As HUVECs cultivadas foram incubadas em meio com TNF-α (100 ng/mL), e as células destacadas das placas de cultura após 24 h foram utilizadas como TNF-HUVECs. As moléculas de superfície celular de HUVECs normais, TNF-HUVECs e células sanguíneas foram analisadas através de citometria de fluxo (FC) para procurar marcadores apropriados para detetar CECs. As HUVECs normais e os TNF-HUVECs foram adicionados ao sangue e detetados através de FC e do método imunobead (IB) para comparar dois métodos. As CEC foram medidas em voluntários saudáveis ​​e doentes em unidades de cuidados intensivos (UCI) utilizando CF.
Resultados: CD146 e CD105 foram altamente expressos em HUVECs e superiores na separação de UVECs de células do sangue total. As taxas médias de deteção de HUVECs normais foram de 75% em FC e 82% em IB. No entanto, as taxas médias de deteção de TNF-HUVECs foram de 64% em FC e 27% em IB (p <0,05). As contagens médias de CEC de 20 voluntários saudáveis ​​e de 16 doentes de UCI foram de 2,8 células/mL e 4,3 células/mL, respetivamente. Num doente de UCI com CIVD induzida por SIRS, as CECs estavam elevadas em 49 células/mL.
Conclusão: O CD146 e o ​​CD105 são adequados para detetar células endoteliais do sangue. O FC é superior ao IB na deteção de células endoteliais em estados inflamatórios graves.