Jornal de Patologia Vegetal e Microbiologia

Abstrato

Detecção do gene da proteína de revestimento do vírus do enrolamento da folha da batata por amplificação isotérmica mediada por loop de transcrição reversa

Mohammad Amin Almasi, Hossein Jafary, Aboubakr Moradi, Neda Zand, Mehdi Aghapour Ojaghkandi e Saeedeh Aghaei

O ensaio de amplificação isotérmica mediada por loop amplifica DNA/RNA com alta especificidade e sensibilidade. Neste estudo, descrevemos um ensaio otimizado de transcrição reversa-LAMP para detecção do vírus Potato Leafroll. Primeiramente, o ensaio DAS-ELISA foi realizado para detectar o vírus em uma coleção contendo 40 amostras suspeitas. Por fim, duas amostras foram detectadas como positivas. Em seguida, as amostras positivas foram verificadas pelos métodos RT-PCR e RT-LAMP. Além disso, os resultados demonstraram que o ensaio RT-LAMP foi 40 vezes sensível e 4 vezes mais rápido em comparação ao RT-PCR. O ensaio RT-LAMP foi realizado em banho-maria, livre de qualquer máquina termocicladora ou de instalações laboratoriais sofisticadas. Além disso, na reação RT-LAMP, as amostras positivas foram detectadas por meio da turbidez produzida pelo pirofosfato de magnésio. Curiosamente, a aplicação de CaCl2 em vez de
MgSO4, que cria pirofosfato de cálcio na reação, pode aumentar significativamente a estabilidade e a concentração de turbidez. Consequentemente, pode ser uma alternativa interessante ao MgSO4. No geral, o ensaio RT-LAMP recentemente desenvolvido pode ser um método sensível, específico e de baixo custo para detecção precoce do Potato Leafroll Virus e também de outros patógenos virais de plantas.