Pharmaceutica Analytica Acta

Abstrato

CTP: Fosfocolina Citidiltransferase Alfa (CCTα) siRNA Induz Morte Celular de Células de Câncer de Pulmão

Rukia Marijani e Barack O. Abonyo

CTP: A colina citidililtransferase (CCT) é uma enzima limitante de taxa necessária para a síntese de fosfatidilcolina (PC) através da via CDP-colina, que é crítica para a proliferação celular. Células condicionalmente sem atividade CCT? sofrem morte por apoptose. A inibição da expressão ou atividade CCT? em células cancerígenas usando técnicas moleculares atuais forneceria um excelente mecanismo não tóxico para matar células cancerígenas. O objetivo deste estudo foi investigar a possibilidade de usar sequências de siRNA CCT? como agentes anticâncer estudando sua capacidade de induzir a morte de células de câncer de pulmão. As linhas de células epiteliais pulmonares p53 positivas, A549 e negativas, H1299 foram transfetadas com várias concentrações (0-800 nM) de sequências de siRNA CCT? (A, B e C) e siRNA de sequência embaralhada (siRNA S) como controle por 24 horas. A inibição da expressão CCT? por vários siRNA foi determinada por análise de Western blot. O microscópio Olympus foi usado para observar o impacto do knockdown de CCT? na estrutura e morfologia celular, enquanto o papel do siRNA de CCT? na toxicidade e sobrevivência celular foi analisado pelos ensaios Cell Titer Blue (CTB) e Lactose desidrogenase (LDH). Todas as sequências de siRNA de CCT? inibiram significativamente a expressão da proteína CCT?. As imagens capturadas pelo microscópio mostraram que as células não tratadas e tratadas com siRNA S estavam intactas e tinham núcleos visíveis, enquanto as células transfetadas com CCT?-siRNA estavam encolhidas com núcleos contendo estruturas granulares escuras semelhantes a corpos apoptóticos. Em concentrações mais altas de CCT?-siRNA, as membranas celulares foram completamente degradadas, mostrando sinais de lise celular. O ensaio CTB revelou que as células não tratadas exibiram alta intensidade de fluorescência, indicando a presença de células mais viáveis, que diminuiu conforme a concentração de CCT?-siRNA aumentou. O ensaio LDH mostrou que as células transfetadas com CCT?-siRNA exibiram maiores absorbâncias do que as células mortas reflexivas não tratadas. Ambos os ensaios indicaram que as células tratadas com siRNA S exibiram resultados semelhantes às células não tratadas, sugerindo que a morte das células foi específica para a inibição de CCTasiRNA. Além disso, a adição de PC não melhorou a viabilidade das células tratadas com CCT?-siRNA. Esses resultados demonstram que os CCT?-siRNAs derrubaram a proteína CCT? resultando em morte celular, o que implica que as sequências podem ser úteis como agentes anticâncer.