Jornal de pesquisa e terapia com células-tronco

Abstrato

A criopreservação afeta a funcionalidade celular das células estaminais derivadas do tecido adiposo expandido a longo prazo

Ali El Othmani, Sabrina Rouam, Anass Abbad, Chaimaa Erraoui, Sara Harriba, Hassan Boukind, Jalal Nourlil, Gabriel Malka e Loubna Mazini

Objectivo: As células estaminais derivadas do tecido adiposo (ADSCs) são células menos imunogénicas e têm um perfil heterogénico de secreção de citocinas, tornando-as melhores candidatas para a imunoterapia baseada em células. Mesmo inatamente ou estimulados, a Interleucina-6 (IL-6) e o Receptor Toll-like 2 (TLR2) segregados pelas ADSC foram modulados e levaram a diferentes vias de mecanismo inflamatório através da secreção de diferentes fatores inflamatórios. Estas propriedades podem ser muito úteis no tratamento de doenças crónicas associadas à inflamação. Para ser utilizada, a expansão ADSC ex-vivo é uma questão crítica antes do transplante ou criopreservação. Foram relatadas alterações celulares funcionais durante a expansão da cultura, sendo suscetíveis de interagir com efeitos de congelação/descongelação, levando a dúvidas sobre os resultados terapêuticos celulares. O objetivo deste estudo é identificar o efeito do congelamento/descongelamento nos diferentes momentos da expansão da cultura na secreção de IL-6 e TLR2.
Métodos: As ADSC foram recolhidas de dadoras jovens, expandidas em cultura e criopreservadas em Soro Fetal Bovino (FBS) e Dimetilsulfóxido (DMSO) após cada passagem durante 6 meses a um ano. A ADSC foi então testada quanto à proliferação, clonogenicidade, expressão génica de citocinas e avaliação antes da criopreservação (fresca) e após o descongelamento e cultivada até à confluência (congelada/descongelada). As ADSC preservadas na Passagem 0 (P0) foram descongeladas e testadas após confluência em P1.
Resultados: As ADSC criopreservadas como P1 resultaram num aumento da clonogenicidade, RNA total e secreção proteica em comparação com as frescas. A quantificação relativa (RQ) e a avaliação de citocinas de IL-6, IL-10, fator de necrose tumoral (TNF)-α e TLR2 revelaram uma regulação positiva moderada de TLR2, enquanto níveis de secreção de IL-6 significativamente mais elevados foram observados a longo prazo expandido e ADSC criopreservada.
Conclusão: Os nossos resultados sugeriram que as ADSC criopreservadas expandidas em cultura a longo prazo eram funcionalmente diferentes e poderiam ter propriedades imunossupressoras prejudicadas através da modulação das respostas inflamatórias pela ativação de IL-6 e TLR2.