Jornal de Distúrbios do Sangue e Transfusão

Abstrato

Criopreservação e enumeração de células progenitoras endoteliais humanas e células endoteliais para ensaios clínicos

Bogoslovsky T, Wang D, Maric D, Scattergood-Keepper L, Spatz M, Auh S e Hallenbeck J

Histórico: As células progenitoras endoteliais (EPC) são marcadores de lesão endotelial e podem servir como um marcador substituto para reparo vascular em ensaios clínicos intervencionistas. Os objetivos deste estudo foram modificar um método de isolamento de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) e enumeração de EPC e células endoteliais maduras (EC) do sangue periférico e avaliar a influência da criopreservação na viabilidade de PBMC e no número de EPC e EC. Pacientes/Métodos: EPC e EC foram analisadas em voluntários saudáveis ​​em PBMC recém-isoladas coletadas em CPT (tubos de preparação de células) e em PBMC criopreservadas com: 1) Gibco RecoveryTM Cell Culture Freezing Medium, 2) meio de congelamento personalizado. A viabilidade de PBMC foi testada usando DAPI. EPC foram delimitadas para CD45- CD34+CD133+/-VEGFR2+/- e EC foram delimitadas para CD45-CD146+CD34+/-VEGFR2+/-. Resultados: A criopreservação por 7 dias a -80°C diminuiu a viabilidade de PBMC de 94 ± 0,5% (fresco) para 84 ± 4% (meio personalizado) e para 69 ± 8% (meio Gibco), enquanto a criopreservação a -65°C diminuiu a viabilidade para 60 ± 6% (p<0,001, meio personalizado) e 49 ± 5% (p<0,001, meio Gibco). Em amostras frescas, EPC precoce (CD45- CD34+CD133+VEGFR2+) foram enumeradas como 0,2 ± 0,06%, EPC tardia (CD45-CD146+CD34+VEGFR2+) como 0,6 ± 0,1% e EC madura (CD45-CD146+CD34-VEGFR2+) como 0,8 ± 0,3% de PBMC vivas. A criopreservação com Gibco e o meio de congelamento personalizado a -80ºC por 7 dias diminuiu os números de EPC e EC, no entanto, essa diminuição não foi estatisticamente significativa. Conclusões: Nossos dados indicam que a criopreservação a -80°C por 7 dias diminui, embora não significativamente, a viabilidade de PBMC e o número de subconjuntos de EC e EPC. Este método pode fornecer uma abordagem otimizada para isolamento e criopreservação de curto prazo de subconjuntos de EPC e de EC madura adequada para ensaios multicêntricos.