Jornal de pesquisa e terapia com células-tronco

Abstrato

A expressão constitutiva de GFP-UTF1 interfere na diferenciação de células ES e EC

Rajkumar P. Thummer, Loes J. Drenth-Diephuis e Bart JL Eggen

As células estaminais embrionárias têm a capacidade de se auto-renovar e podem diferenciar-se em todos os tipos de células das três linhagens germinativas embrionárias. O gene do Fator de Transcrição 1 de células embrionárias indiferenciadas (UTF1) é altamente expresso nas células ES e já tínhamos anteriormente reportado que o UTF1 está fortemente associado à cromatina e é necessário para a diferenciação de células estaminais embrionárias (ES) e de carcinoma embrionário ( CE) de ratinhos pluripotentes . Neste estudo, geramos linhas celulares ES e EC expressando constitutivamente GFP-UTF1 para investigar melhor o seu papel na diferenciação. As células ES e EC que expressam constitutivamente GFP-UTF1 foram suprimidas na sua proliferação e ainda eram dependentes do LIF para a auto-renovação. A diferenciação do corpo embrionário (EB) das células ES com sobreexpressão de GFP-UTF1 mostrou tanto uma diferenciação normal como uma diferenciação retardada ou incompleta de um subconjunto de células. O GFP-UTF1 foi persistentemente expresso nas células indiferenciadas, enquanto a expressão do GFP-UTF1 não foi detetada nas células diferenciadas. Onde as células ES que expressam GFP-UTF1 se diferenciaram normalmente em resposta ao DMSO, a diferenciação das células EC foi completamente bloqueada. Quando as células ES e EC que expressam GFP-UTF1 foram tratadas com AR, foram induzidos marcadores de diferenciação e os níveis endógenos de proteína UTF1 e GFP-UTF1 diminuíram. No entanto, o ARNm de GFP-UTF1 e UTF1 (em células ES) foi ainda detectado, indicando que a degradação da proteína (GFP-) UTF1 precedeu a regulação negativa do ARNm de (GFP-) UTF1, sugerindo que a RA induziu a degradação de UTF1. Resumindo estes dados indicam que, à semelhança da depleção de UTF1, a sobreexpressão de GFP-UTF1 interferiu com a diferenciação das células ES e EC.