Jornal de Pesquisa e Terapêutica Biomolecular

Abstrato

Acilação Complexa da Angiotensina II por Reagentes de Biotina Ligados a N-Hidroxissulfosuccinimida

Qinfeng Liu, Andres Lam e Achyut Kathuria

As biotinas ligadas a N-hidroxisulfosuccinimida (sulfoNHS-biotinas) são marcadores de biotina solúveis em água comummente utilizados para conjugar uma porção de biotina a proteínas por rápida N-acilação de aminas primárias. A acilação inesperada de O pela sulfoNHSbiotina na tirosina da Angiotensina II (Ag-II) e uma acilação no terceiro local incapaz de caracterizar foram identificadas por LC-MS, para além da N-acilação esperada no terminal N da Ag-II. A N-acilação sofre apenas uma hidrólise incompleta em ácido fórmico a 0,1%, e não a pH 7,2 e 8,0, enquanto que duas acilações inesperadas hidrolisam em ambas as condições, mas a sua hidrólise em ácido fórmico a 0,1% foi muito mais rápida. O tratamento com ditiotreitol catalisou seletivamente a hidrólise de ambas as acilações inesperadas, mas não a N-acilação de Ag-II. O rendimento máximo de O-acilação da tirosina Ag-II foi de 99% a pH 7,2 e 95% a pH 8,0 em comparação com a N-acilação da lisina quando reagiu com excesso de sulfoNHS-biotina com estes rendimentos de 94 % a pH 7,2 e 96 % a pH 8,0. A acilação do terceiro sítio não caracterizado de Ag-II apresentou um rendimento máximo de aproximadamente 17% a pH 7,2, mas um rendimento superior (≥ 47%) a pH 8,0 em 30 min. A O-acilação inesperada da tirosina Ag-II ocorreu em 1 min a pH 7,2 ou pH 8,0, tão rapidamente como a N-acilação, enquanto a outra acilação inesperada exigiu mais tempo para ser concluída a pH 8,0.