Jornal de tecnologia microbiana e bioquímica

Abstrato

Comparação de diferentes métodos para o isolamento de ADN bacteriano a partir de tecidos de ostras de retalho

Qian Zhang, Min Dai, Yanhong Liu, Min Zhou, Xianming Shi e Dapeng Wang

As ostras são filtradores que bioacumulam bactérias na água durante a alimentação. Para avaliar o ADN genómico bacteriano extraído de tecidos de ostras comerciais, incluindo as brânquias e as glândulas digestivas, foram utilizados quatro métodos de isolamento. A extração de ADN genómico foi realizada utilizando o Allmag™ Blood Genomic DNA (Allrun, Xangai, China), os kits MiniBEST Bacterial Genomic DNA Extraction (Takara, Dalian, China) e os métodos de fenol-clorofórmio e lise em ebulição. A concentração do ADN genómico foi medida usando um espectrofotómetro. A pureza do ADN genómico foi avaliada por amplificação por PCR de 16S rDNA seguida da determinação da eficiência de clonagem do amplicon no vetor pMD19-T. Além disso, a qualidade do ADN bacteriano foi também avaliada por ensaios de PCR utilizando um par de iniciadores específicos da espécie para Vibrio parahaemolyticus. Os nossos resultados mostraram que os dois kits comerciais produziram ADN de maior pureza, mas com rendimentos mais baixos. O método fenol-clorofórmio produziu o maior rendimento, embora fosse demorado. O método de lise por ebulição foi simples e económico; no entanto, só era adequado isolar ADN genómico de bactérias presentes em amostras de retalho após uma etapa de enriquecimento. Os dois kits comerciais eram bons candidatos para a extração de ADN genómico de tecidos de ostras no retalho sem enriquecimento.