Genética hereditária: pesquisas atuais

Abstrato

Comparação da enumeração de células CD34+ e CD45+ por três métodos fluorescentes diferentes

Tzonka Godjevargova

Resumo
Aenumeração de células estaminais e leucócitos em amostras de sangue periférico e aférese foi realizada utilizando a expressão de biomarcadores proteicos CD34+ e CD45+ na sua superfície celular. O objetivo deste estudo foi a contagem simultânea de células estaminais vivas e leucócitos em amostras de aférese utilizando dois conjugados fluorescentes diferentes. O conjugado entre o anticorpo monoclonal anti-CD34 e o corante fluorescente DR110 corou as células estaminais de cor verde. O conjugado entre o anticorpo monoclonal anti-CD45 e o corante fluorescente ATTO620 corou os leucócitos de cor vermelha. Os conjugados anticorpo anti-CD34 – DR110 e anticorpo anti-CD45 – ATTO620 foram preparados pelo método da carbodiimida e purificados por filtração em gel. A contagem foi realizada utilizando um novo microscópio de fluorescência automático EasyCounter BC. As células mortas foram contadas pelo corante monometino cianina – Sofia Green. Foram realizadas análises a seis amostras de aférese. Os resultados obtidos pelo EasyCounter BC foram comparados com resultados recebidos por outros dois métodos padrão – citometria de fluxo (Guava easyCyte 8HT) e método microscópico fluorescente (Olympus BX51). As contagens de células obtidas no EasyCounter BC e no citómetro de fluxo foram muito semelhantes. Os coeficientes de variação dos resultados obtidos com o EasyCounter BC (3-6%) foram inferiores aos do citómetro de fluxo (5-8%) e do microscópio Olympus (14-18%).