Jornal de tecnologia microbiana e bioquímica

Abstrato

Comparação entre duas construções de L-Asparaginase II de Erwinia carotovora: clonagem, expressão heteróloga, purificação e caracterização cinética

Priscila Lamb Wink, Heique Marlis Bogdawa, Gaby Renard, Jocelei Maria Chies, Luiz Augusto Basso e Diógenes Santiago Santos

A L-Asparaginase II de Erwinia carotovora pode representar uma terapia alternativa importante no tratamento da leucemia linfoblástica aguda infantil, apesar da sua promissora atividade de glutaminase mais baixa do que as L-asparaginases II de Escherichia coli e Erwinia chrysanthemi , atualmente utilizadas no tratamento desta doença. Aqui descrevemos a clonagem, expressão, purificação e determinação de parâmetros cinéticos de estado estacionário para a L-asparaginase II de E. carotovora: com (AspSP) e sem o péptido sinal (AspMP). O AspMP foi purificado até à homogeneidade por um protocolo de etapa única com um rendimento de 91%, e o AspSP por um protocolo de duas etapas com um rendimento de 28%. Além disso, ambas as enzimas apresentaram atividades específicas elevadas semelhantes: 208,1 e 237,6 U mg ^-1 , respetivamente. Os valores de Km e k _cat mostraram que o AspMP apresenta menor atividade de glutaminase que o AspSP. Além disso, o AspMP é produzido por um protocolo de purificação mais simples e com maior rendimento. Este processo pode ser passível de produção em grande escala e ser de interesse para investigadores e empresas biofarmacêuticas