Jornal de tecnologia microbiana e bioquímica

Abstrato

Combinação de transcrição reversa e análise de polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição multienzimática para deteção rápida de Escherichia Coli

Akifumi Hosoda, Arata Komaba, Michiru Kishimoto e Hiroto Tamura

Os métodos de cultivo são utilizados para monitorizar microrganismos patogénicos em alimentos. No entanto, os métodos atuais requerem alguns dias para produzir resultados, e os produtos são frequentemente colocados à venda antes de os resultados da análise microbiológica estarem disponíveis. Desenvolvemos um sistema de extração de RNA e deteção de microrganismos utilizando amostras de alimentos modelo inoculadas com Escherichia coli K-12 e O157:H7 (GTC 14536) (0 UFC/g e 1×101–104 UFC/g). Antes da extração do RNA, as células vivas ou mortas foram inoculadas nas amostras de alimentos, as amostras foram homogeneizadas e os RNAs extraídos foram utilizados para sintetizar cDNAs utilizando 6-mer aleatórios. A PCR foi utilizada para analisar os genes alvo, e os produtos da PCR foram digeridos com duas enzimas de restrição (HhaI e HaeIII) para analisar o polimorfismo de comprimento de fragmentos de restrição (RFLP). A PCR confirmou a extração de RNA e a síntese de cDNA até 1×101 UFC/g a partir de amostras de células vivas. O RFLP multienzimático (MeRFLP) mostrou que os tamanhos dos fragmentos de ADN obtidos eram consistentes com os tamanhos teóricos dos fragmentos, sugerindo que a transcrição reversa-MeRFLP (RT-MeRFLP) poderia identificar as bactérias alvo. Estes resultados sugerem que o RT-MeRFLP, que não requer cultura e pode ser concluído em 6,5 horas, é uma abordagem promissora para um sistema de baixo custo, rápido e fiável para a identificação de bactérias em alimentos.