Jornal de Bacteriologia e Parasitologia

Abstrato

Caracterização de proteínas solúveis e ligadas à membrana de Toxoplasma gondii como marcadores de diagnóstico de infecção

Imen Khammari, Sami Lakhal, Benoît Westermann, Alia Benkahla, Aïda Bouratbine, Alain Van Dorsselaer, Moncef Ben Saïd, Christine Schaeffer-Reiss e Fatma Saghrouni

No presente estudo, aplicámos a combinação de eletroforese em gel unidimensional, imunotransferência e cromatografia nanolíquida-espectrometria de massas em tandem (nanoLC-MS/MS) para identificar potenciais proteínas imunogénicas de taquizoítos de Toxoplasma gondii que podem ser utilizadas para o desenvolvimento de ensaios fiáveis. no sorodiagnóstico da toxoplasmose adquirida em indivíduos imunocompetentes. Para tal, desenvolvemos um imunoblot utilizando extractos solúveis e de membrana de taquizoítos GT1 de Toxoplasma gondii e testámos 194 soros positivos e 100 negativos obtidos de grávidas.

Cinco bandas de antigénios solúveis (98 kDa, 36 kDa, 33 kDa, 32 kDa e 21 kDa) e 4 bandas de antigénios de membrana (41 kDa, 35 kDa, 32 kDa e 30 kDa) foram selecionadas como as mais valiosas em termos de sensibilidade e especificidade. De entre estas bandas, apenas 2 bandas de antigénio solúvel (33 kDa e 32 kDa) e 2 bandas de antigénio de membrana (32 kDa e 30 kDa) apresentaram uma especificidade ≥ 90%.

Após espectrometria de massas e análise bioinformática, foram identificadas 7 proteínas como potenciais marcadores para o sorodiagnóstico da toxoplasmose. Estas proteínas são: SRS34A, GRA7, GRA1, DG32, MIC5, ROP5 e Toxofilina. Estas proteínas apresentaram uma homologia de 86% a 100% com proteínas de ambas as estirpes VEG e ME49 de T. gondii e uma homologia de 58% a 87% com Hammondia hammondi ; e podem ser considerados candidatos atractivos para o desenvolvimento de um teste imunocromatográfico que possa ser utilizado para o diagnóstico rápido da toxoplasmose e como teste confirmatório quando as técnicas de rotina fornecem resultados duvidosos.