Jornal de Pesquisa e Desenvolvimento em Aquicultura

Abstrato

cDNAs que codificam a quitina sintase de camarão (Pandalopsis Japonica): caracterização molecular e análise de expressão

Md. Hasan Uddowla, Ah Ran Kim, Won-gyu Park, Hyun-Woo Kim*

O crescimento dos crustáceos ocorre por meio da muda, a troca periódica do exoesqueleto. Entender os genes envolvidos no metabolismo da quitina associados ao ciclo periódico da muda é importante para várias aplicações na aquicultura de crustáceos decápodes. A quitina sintase é uma enzima importante na via biossintética da quitina que desempenha um papel importante na síntese de nova cutícula após a muda. Neste estudo, isolamos um cDNA de comprimento total que codifica a quitina sintase (PajCHS) do Pandalopsis japonica por meio de uma combinação de clonagem baseada em PCR (reação em cadeia da polimerase) e análise de bioinformática. O PajCHS identificado codifica uma proteína transmembrana com 1525 resíduos de aminoácidos (175 kDa). A comparação com outros CHSs de insetos revelou que PajCHS contém três domínios: domínio N-terminal A, domínio catalítico B e domínio C-terminal C. Três motivos conservados (EDR, QRRRW e SWGTR) também foram bem conservados dentro e perto do domínio catalítico B, sugerindo que Paj-CHS é funcionalmente ativo. A variação na hélice transmembrana dentro dos domínios N-terminal e C-terminal sugeriu que a orientação de cada CHS pode ser diferente. A análise filogenética sugeriu que PajCHS é um ortólogo de membros do grupo CHS1 de espécies de insetos. No entanto, os perfis de expressão do tecido indicaram que epiderme, hepatopâncreas, intestino e brânquia foram os principais locais de produção para o transcrito PajCHS, que é consideravelmente diferente do CHS1 de inseto. Os resultados da qPCR mostraram que a ablação do pedúnculo ocular e a injeção de 20 hidroxiecdisona (20E) aumentaram o nível de expressão do mRNA do PajCHS, sugerindo que a expressão do PajCHS1 pode ser controlada pelo 20E endógeno.