As nanopartículas de prata foram produzidas a partir de extrato livre de células de Penicillium fellutanum com nitrato de prata aquoso. As nanopartículas de prata sintetizadas foram produzidas na forma coloidal fora da célula fúngica no meio externo de extrato de malte de levedura (YM). A mudança visual na cor do extrato de amarelo profundo para cinzento indica a biorredução de iões metálicos de prata, resultando na síntese de nanopartículas de prata. A mistura reacional foi caracterizada por espectrometria UV-visível e a absorção foi medida de 350 nm a 450 nm e o λ-max foi encontrado a 430 nm. A eficácia antibacteriana das AgNPs foi investigada através do método de difusão em disco contra as bactérias Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Aeromonas hydrophila e Klebsiella pneumoniae e foi considerado um agente antibacteriano eficaz. Assim, o Penicillium fellutanum poderá ser utilizado como fonte de nanopartículas de prata, um processo alternativo amigo do ambiente para a micossíntese de AgNPs estáveis com futuras aplicações na área biomédica com base nas suas propriedades antibacterianas.