Jornal de pesquisa e terapia com células-tronco

Abstrato

Critérios de avaliação da biocompatibilidade para novos materiais de xenoenxerto: distribuição e quantificação do ácido nucleico remanescente e do epítopo alfa-Gal

Naso Filippo, Aguiari Paola, Iop Laura, Spina Michele e Gerosa Gino

Objectivo: Estruturas xenogénicas descelularizadas comercialmente são actualmente empregues para a cura de tecidos doentes. Estranhamente, a sua utilização é permitida mesmo na ausência de qualquer avaliação da eliminação de material celular xenogénico, como os epítopos alfa-Gal. Além disso, os procedimentos de descelularização não são monitorizados para comprovar a eliminação do potencial calcificado associado aos restos de ácidos nucleicos. O tratamento actual com glutaraldeído é incapaz de garantir uma imunotolerância completa dos tecidos xenogénicos implantados, reduzindo mas não eliminando a imunogenicidade particularmente para o epítopo alfa-Gal (o maior obstáculo para o sucesso do xenotransplante). Recentemente, o nosso grupo reportou extensivamente estudos focados na avaliação das propriedades de biocompatibilidade de tecidos xenogénicos. Neste relatório estamos a realizar esta investigação e deteção de ácido nucleico em novos tecidos xenogénicos que mostraram resultados pré-clínicos/clínicos muito promissores em diferentes áreas de aplicação. Métodos: A quantificação da alfa-Gal foi realizada através de um teste ELISA previamente desenvolvido e patenteado pela nossa equipa de investigação que envolve a utilização do anticorpo monoclonal anti-apha-Gal M86. A análise de imunofluorescência foi realizada para a distribuição visual dos epítopos xenogénicos e dos resíduos de ácidos nucleicos. Finalmente, para a quantificação do ADN total, foi adoptado um kit comercialmente disponível. Resultados: Embora a quantidade e distribuição dos epítopos alfa-Gal tenham sido diferentes entre os biomateriais investigados, a presença de restos de ácidos nucleicos revelou-se como uma característica comum, mesmo nos tecidos entregues como acelulares pelo fabricante. Conclusão: Avaliações quantitativas insuficientes realizadas a nível pré-clínico sobre o conteúdo residual de epítopos xenogénicos, detergentes e materiais de ácidos nucleicos em andaimes levaram a resultados decepcionantes e desastrosos. O risco de recorrência destes acidentes dramáticos permanece muito elevado, a menos que parâmetros de segurança, entre os quais a remoção completa dos principais determinantes xenogénicos (alfa-Gal) e resíduos de ácidos nucleicos propensos à calcificação , sejam identificados e introduzidos nas práticas de fabrico .