Jornal de tecnologia microbiana e bioquímica

Abstrato

Expressão baseada no promotor da Arabinose da hormona de crescimento humana recombinante biologicamente ativa em E. coli: estratégias para a sobreexpressão e métodos simples de purificação

Sudheerbabu Soorapaneni, Anjali Apte-Deshpande, Ketaki Sabnis-Prasad, Jitendra Kumar, Veena A Raiker, Prakash Kotwal e Sriram Padmanabhan

Foi concebido e implementado um sistema de expressão baseado num promotor da arabinose em E. coli para a produção e purificação da hormona de crescimento humana recombinante (rhGH). Os estudos em frascos agitados indicaram quantidades apreciáveis ​​de rhGH expressas no vetor pBAD24 modificado (pBAD24M) em comparação com o vetor pBAD24 original. Embora os níveis de rhGH tenham atingido apenas 75 mg l ^-1 com pBAD24 num biorreator, atingiram ~ 1860 mg l ^-1 com o vetor pBAD24M em condições semelhantes às avaliadas por densitometria de proteínas resolvidas por eletroforese em gel de poliacrilamida com dodecil sulfato de sódio (SDS– PÁGINA). A proteína rhGH foi purificada com sucesso a partir de corpos de inclusão após desnaturação da ureia por duas etapas simples de cromatografia de troca iónica com uma recuperação global de 40% totalizando ~750 mg l ^-1 de hGH purificado, que é o maior rendimento relatado de rhGH purificado até à data. Tal rhGH derivado de bactérias purificadas foi caracterizado por sequência N-terminal, estudos de espectros de CD, análise de impressão digital em massa e análise no bioanalisador Agilent 2100. A bioatividade do rhGH purificado foi comparável à do hGH (somatotropina) comercialmente disponível.