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Abstrato
Aplicação da recombinação homóloga dirigida por CRISPR/cas9 à geração de células tumorais humanas com knockout condicional de um locus de microRNA ligado ao X
Aurélie Van Tongelen, Axelle Loriot, Olivier De Backer e Charles De Smet
O estudo da função celular dos microRNAs requer estratégias genéticas para gerar a sua perda de função. Recentemente, foi proposta uma nova abordagem de deleção genómica dirigida, que se baseia na indução de cortes de ADN específicos do local com complexos de ribonucleoproteína Cas9/gRNA, combinada com inserção dependente de recombinação homóloga de cassetes que contêm sequências para Cre-lox ou FLP -Sistemas FRT. Aqui, fornecemos um relatório técnico que descreve a aplicação deste procedimento de recombinação homóloga dirigida por CRISPR/Cas9 para a geração de células tumorais humanas em que o knockout condicional de um cluster de microRNAs ligado ao X (miR-105/miR-767) pode ser induzido . Descrevemos as sucessivas etapas de engenharia genética e seleção de clones celulares que nos permitiram gerar células com a edição genómica esperada.