Qaisar Hussain
A ação natural líquida de alto desempenho (HPLC) e a ação natural líquida de ultra-alto desempenho (UHPLC ou UPLC) são as ferramentas mais utilizadas para a análise e controlo interno de rotina de ingredientes farmacêuticos ativos (API). Depende de bombas para fazer passar um solvente líquido controlado contendo a mistura da amostra através de uma coluna cheia de um adsorvente sólido. cada parte da amostra interage ligeiramente com o adsorvente, provocando taxas de fluxo completamente diferentes para as várias partes e resultando na separação das partes à medida que emanam da coluna. A HPLC distingue-se da ação natural líquida antiga porque as pressões de funcionamento são consideravelmente mais elevadas (50-350 bar), enquanto a ação natural líquida normal depende geralmente da força da gravidade para passar a secção móvel através da coluna. devido à pequena quantidade de amostra separada em HPLC analítico, as dimensões típicas da coluna são de 2,1 a 4,6 unidades lineares métricas de diâmetro e de 30 a 250 unidades lineares métricas de comprimento. além disso, são criadas colunas de HPLC com partículas adsorventes mais pequenas (2–50 μm em tamanho médio de partícula). isto proporciona uma resolução superior ao HPLC (a capacidade de diferenciar entre compostos) ao separar misturas, o que o torna uma técnica de ação natural popular.
HPLC de fase normal (NP-HPLC), esta metodologia separa os analitos com base na sua afinidade por uma superfície polar estacionária como o dióxido de silício, portanto suporta a capacidade do analito interagir em interações polares com a superfície do material. A NP-HPLC utiliza uma secção móvel não polar e não aquosa e funciona eficazmente para separar analitos sem demora solúveis em solventes não polares. O analito associa-se e é mantido pela secção estacionária polar. as forças de assimilação da superfície aumentam com o aumento da polaridade do analito. A força da interação depende não só dos grupos funcionais presentes na estrutura da molécula do analito, mas também de fatores estéricos. O resultado do obstáculo estérico na força de interação permite que esta metodologia resolva isómeros estruturais. a utilização de muitos solventes polares na secção móvel pode aumentar o tempo de retenção dos analitos, enquanto que muitos solventes hidrofóbicos tendem a induzir uma extração mais rápida. Os solventes altamente polares, como os vestígios de água na secção móvel, tendem a acumular-se na superfície sólida da secção estacionária, formando uma camada fixa estacionária (água) que se considera que desempenha um papel ativo na retenção. Este comportamento é de certa forma peculiar à ação natural da secção tradicional porque é governado quase exclusivamente pelo mecanismo quimiosortivo associado, ou seja, os analitos movem-se com uma superfície sólida em vez de com a camada solvatada de uma substância ligada à superfície do material. A ação natural de assimilação superficial continua a ser amplamente utilizada para separações estruturais de compostos em cada coluna e formatos de ação natural de camada fina em suportes ativados (secos) de dióxido de silício ou óxido de alumínio.
UPLC ou UHPLC (cromatografia líquida de ultra alto desempenho) e HPLC são técnicas de ação natural líquida para separar as partes de um composto ou mistura. embora o UHPLC e o HPLC tenham benefícios em vários casos, há alturas em que o UHPLC é claramente a escolha mais fácil. acima de tudo, o UHPLC oferece uma maior resolução graças às partículas mais pequenas da coluna. Dependendo do tipo de material dentro da coluna (também conhecido como colofónia, ou fase estacionária), o UHPLC irá separar os compostos com base no seu tamanho molecular, polaridade ou carga elétrica. o principal desafio necessário nestas técnicas é a separação rápida e económica. ambas as técnicas são mais populares devido à sua propriedade, alta precisão e exatidão memorável. Por outro lado, necessitam de algumas limitações: em alguns casos, o HPLC antigo utiliza grandes quantidades de solventes orgânicos com um tempo de análise mais longo e, o que é mais, o UHPLC tem uma elevada contrapressão e aquecimento por resistência. para ultrapassar estas limitações, os cientistas desenvolveram um novo tipo de coluna de partículas. Em geral, são utilizados dois tipos diferentes de dióxido de silício de material de coluna suportados na sua estrutura para HPLC e UHPLC. As fases estacionárias que possuem partículas de dióxido de silício totalmente porosas cumprem os critérios essenciais de estudo, no entanto apresentam todas as restrições da HPLC. No entanto, nos últimos anos, as partículas de dióxido de silício núcleo-invólucro (uma combinação de núcleo sólido e invólucro poroso) têm sido progressivamente utilizadas para uma separação extremamente económica com tempos de execução reduzidos. Assim, a tecnologia core-shell proporciona separações económicas semelhantes porque as partículas sub-dois μm medem o quadrado empregue em UHPLC, ao mesmo tempo que elimina as desvantagens (contrapressão potencialmente menor). Os principais fatores para o quadrado das partículas núcleo-invólucro medem o tamanho e a espessura da camada porosa da casca, a última das quais pode ser explicada pela equação de Van Deemter. As colunas preenchidas com partículas core-shell são utilizadas numa vasta gama de aplicações para análise e controlo interno de substâncias ativas farmacêuticas.