Jornal de tecnologia microbiana e bioquímica

Abstrato

Tira de teste anti-LPS para deteção de alimentos contaminados com Salmonella e E. coli

Alvin Wang, Gabriel Molina, Victor Prima e Kevin KW Wang

As enterobactérias como a E. coli e a Salmonella libertam uma endotoxina, ou lipopolissacárido (LPS), que contribui para os sintomas de intoxicação alimentar. A nossa hipótese é que o LPS poderia ser detectado por um simples teste de tira, detectando assim a presença de enterobactérias nos alimentos. Aqui descrevemos o desenvolvimento de um novo teste de tira de deteção Anti-LPS. Tiras de teste flexíveis de poliestireno com uma membrana absorvente de poli(fluoreto de vinilideno) aderida numa extremidade foram expostas a várias diluições de alimentos ou fontes bacterianas. Seguiu-se uma incubação sequencial com um anticorpo primário anti-LPS, anticorpo secundário biotinilado e enzima fosfatase alcalina ligada à estreptavidina. A tira de ensaio foi então revelada com o substrato 5-bromo-4-cloro-3-indolil fosfato/nitroazul tetrazólio. Assim, a presença do produto precipitado roxo indicaria a presença de LPS e enterobactérias. A intensidade ou escuridão da cor foi quantificada densitometricamente e comparada com a curva padrão do LPS. O ensaio da tira de teste demonstrou detetar prontamente níveis tão baixos como 25 ng/mL de LPS purificado. Além disso, o ensaio de tiras de teste anti-LPS pode detetar e quantificar com sensibilidade o LPS libertado por E. coli viva em meios de cultura. Por fim, três grupos de alimentos (fatias de morango, folhas de espinafre e carne picada) foram inoculados com E. coli durante dois momentos à temperatura ambiente e, de seguida, a água de enxaguamento de cada preparação alimentar foi submetida ao ensaio de tira de teste anti-LPS. Para todos os três grupos de alimentos, o ensaio de tiras de teste pode detetar e quantificar prontamente a contaminação bacteriana de 8 e 24 horas nos seus respetivos controlos não contaminados. Em conclusão, foi desenvolvido um protótipo simples de teste de tira anti-LPS para detetar prontamente a contaminação por enterobactérias em alimentos comuns.