Abstrato

Efeitos do álcool na produção de TNF-α e IL-10 num modelo ex-vivo de sangue total estimulado por LPS

Alexandra Gavala, Pavlos Myrianthefs, Kyriaki Venetsanou, George Baltopoulos e Georgios Alevizopoulos

A exposição ao álcool está relacionada com o aumento da suscetibilidade a infeções. Investigámos o efeito da exposição aguda ao álcool na produção de citocinas pró e anti-inflamatórias num modelo ex-vivo de estimulação do sangue total com lipopolissacárido (LPS). Foram recolhidos 10 ml de sangue total de 24 voluntários saudáveis ​​(todos homens) com idades entre os 36,5 ± 1,4 anos. Cada amostra foi transferida para dois tubos, sem e com EDTA como anticoagulante, em condições estéreis. Tivemos 14 grupos: o grupo de controlo em que o sangue total foi incubado sem qualquer outra intervenção, o grupo de LPS em que o sangue total foi estimulado apenas com LPS e 12 grupos de álcool com (6 grupos) e sem estimulação com LPS (6 grupos ) utilizando seis doses diferentes de álcool (5‚ 12,5‚ 25‚ 50‚ 100 e 200mM). O LPS (500pg) foi adicionado após pré-tratamento com álcool durante 10 minutos. As amostras de sangue foram diluídas 1:10 em meio de cultura RPMI 1640 (100μl de sangue total adicionado em 900μl RPMI 1640) e de seguida foram adicionados solução alcoólica e LPS de acordo com o protocolo do estudo para um período de incubação de 4 horas a 37°C . Os sobrenadantes da cultura celular foram isolados com centrifugação a 1.800 rpm, durante 5 min à temperatura ambiente e armazenados a -70°C até às medições. Os níveis de citocinas foram determinados no sobrenadante da cultura pelo método ELISA. O álcool não teve qualquer efeito na produção de citocinas quando incubado apenas com sangue total. O TNF-α IL-6 e IL-10 aumentaram significativamente após a estimulação com LPS. O álcool não teve qualquer efeito na produção de IL-6 após desafio com LPS, mas diminuiu significativamente a produção de TNF-α e IL-10 na presença de desafio com LPS de 25mM a 200mM de forma dose-dependente. Conclusivamente, o TNF-α e a IL-10 diminuíram significativamente após a exposição ao álcool de uma forma dependente da dose num modelo de estimulação do sangue total com LPS exvivo expressando tanto a supressão da resposta pró como anti-inflamatória.

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