Pharmaceutica Analytica Acta

Abstrato

Um sistema tridimensional de monitoramento de contração de gel de colágeno que usa uma malha trabecular suína para triagem de agentes antipressão intraocular

Hiroyoshi Kasai, Mitsue Ishisaka, Eiichi Shirasawa e Hideaki Hara

Acredita-se que o estado contrátil da malha trabecular (TM) afeta o fluxo de saída do humor aquoso e a pressão intraocular (PIO). Foi sugerido que o relaxamento da TM pode aumentar o fluxo de saída convencional aumentando a porosidade do tecido e levar ao declínio da PIO, portanto, pode ser um alvo terapêutico para o glaucoma. Consequentemente, investigamos os efeitos de vários agentes na contratilidade de células cultivadas da malha trabecular suína (pTM) usando um ensaio de gel de colágeno tridimensional (3-D), a fim de desenvolver um método de triagem para identificar novos agentes anti-PIO. Identificamos células pTM, obtidas de globos oculares suínos, pelo formato da célula e expressão de receptores de lipoproteína de baixa densidade (LDL). As células pTM, quando incorporadas em géis de colágeno, mostraram atividade contrátil dependente da concentração de soro bovino fetal (FBS). Vários inibidores de cinase, especialmente inibidores de cinase dependente de ciclina celular (rescovitina), proteína cinase dependente de rho e Ca2+ (Y-27632), tirosina cinase (tirfostina AG879), fosfatidilinositol 3-cinase (bisindolilmaleimida I, BIM I) e Ca2+/calmodulina cinase (queleritrina), inibiram fortemente a contração do gel de colágeno. Essa contração também foi inibida pelo ácido etacrínico, por inibidores de Na+, K+-ATPase (ouabaína), Ca2+-ATPase (tapsigargina) e 3-hidroxi-3-metilglutaril coenzima A (HMG-CoA) redutase, por um inibidor não seletivo de fosfodiesterase (papaverina) e por adenosina A2 (metrifudil) e agonistas do receptor canabinoide (CP-55940). Além disso, BIM I, sinvastatina, BQ-123 e CP-55940 demonstraram citotoxicidade parcial. As atividades inibitórias de queleritrina e tapsigargina também foram atribuídas à citotoxicidade. Essas descobertas indicam que esse sistema de monitoramento de contração de gel de colágeno 3-D in vitro pode ser usado como um método de triagem rápido e sensível para identificar novos agentes que induzem o relaxamento das células pTM e podem detectar simultaneamente os efeitos principais e colaterais.