Jornal de Bacteriologia e Parasitologia

Abstrato

Um método simples de detecção visual do vírus Zika humano usando amplificação isotérmica mediada por loop de transcrição reversa

Yang Li1,2, Zhenzhou Wan3, Yi Zhou2,4, Xia Jin5, Haifeng Shi1* e Chiyu Zhang 2*

O vírus Zika (ZIKV) é um patógeno emergente transmitido por mosquitos e pertence à família Flaviviridae, gênero Flavivirus. A infecção por ZIKV foi associada à microcefalia e à infertilidade masculina. A vigilância da infecção por ZIKA é importante para a saúde reprodutiva humana e o controle da disseminação do vírus. O desenvolvimento de um ensaio rápido e sensível para detecção de ZIKV é urgentemente necessário para a China e outros países do Sudeste Asiático. Aqui, desenvolvemos um ensaio de amplificação isotérmica mediada por loop de transcrição reversa (RT-LAMP) de uma etapa e tubo único para detecção de ZIKV. O ensaio tem um limite de detecção (LOD) de 88 cópias de RNA de Zika por reação de 25 μl e pode ser concluído em 20 minutos quando a entrada do modelo é maior que o LOD. Além disso, ele exibe alta especificidade e boa reprodutibilidade. É importante ressaltar que o resultado pode ser visualizado por alteração colorimétrica quando HNB ou calceína são usados. Para avaliar a viabilidade do ensaio, uma comparação entre o ensaio RT-LAMP e um RT-qPCR mais conversivo foi realizada usando 20 sobrenadantes de cultura de células e três amostras de urina. O RT-LAMP do ZIKV mostrou concordância perfeita na detecção com o RT-qPCR. Esses resultados demonstram que o RT-LAMP do ZIKV recentemente desenvolvido é simples, rápido e bem adequado para vigilância do ZIKV, especialmente em regiões com recursos limitados.