Jornal de Patologia Vegetal e Microbiologia

Abstrato

Um método simples, rápido e eficiente de isolamento de RNA do vírus do mosaico da Pepino a partir de frutos de tomate

Amal Souiri, Mustapha Zemzami, Khadija Khataby, Hayat Laatiris, Saaid Amzazi e Moulay Mustapha Ennaji

A principal preocupação na detecção molecular de patógenos virais de RNA em plantas é a obtenção de boa qualidade do RNA extraído. Vários métodos de isolamento de RNAs de tecidos ricos e pobres em polissacarídeos e outras plantas recalcitrantes estão disponíveis. No entanto, o uso de métodos que consomem tempo e reagentes e aqueles que envolvem produtos químicos perigosos é um tanto trabalhoso e problemático, especialmente quando não é necessário para propósitos específicos como isolar RNA viral de frutos de tomate, daí o objetivo deste artigo. Descrevemos um método alternativo, simples e rápido para preparar RNA viral de frutos de tomate sem etapas de extração e purificação de RNA, caso do vírus do mosaico da Pepino ( PepMV ).

O método emprega tratamento mecânico e suspensão em água. A qualidade do RNA obtido foi julgada por leituras espectrométricas e validada em ensaios de RT-PCR. O protocolo usado foi comparado com o método TRIzol usual. Os resultados mostraram que o rendimento e a qualidade do RNA obtido usando o método proposto são eficientes e altamente produtivos em comparação com o método TRIzol. Além disso, o método desenvolvido permitiu com sucesso uma detecção sensível e reprodutível de bandas previstas de PepMV em RT-PCR. Assim, a detecção molecular de PepMV de frutos de tomate pode ser realizada rotineiramente sem isolamento de RNA fastidioso. Além disso, isso tornará o diagnóstico de outros vírus de RNA que infectam plantações de tomate mais fácil e menos demorado, em comparação com os outros métodos realizados com kits comerciais caros e aqueles que envolvem produtos químicos tóxicos. Finalmente, o método estabelecido descrito contribuirá efetivamente em estratégias de programas fitossanitários e de certificação de plantações de tomate em todo o mundo.