Jornal de Patologia Vegetal e Microbiologia

Abstrato

Um método simples e eficiente para extrair DNA de S. Rolfsii para estudos de diversidade baseados em PCR

Masculino AS, Kato F e Mukankusi CM

Os métodos atuais de extração de DNA de Sclerotium rolfsii usam muitos produtos químicos orgânicos perigosos para extrair DNA de alta qualidade. A extração do DNA é ainda mais complicada por exopolissacarídeos que se ligam ao DNA, tornando-o mucilaginoso. Desenvolvemos um protocolo simples e eficiente para extrair DNA de alta qualidade de S. rolfsii. Nosso método usa um tampão de extração de DNA que contém dodecil sulfato de sódio e proteinase K para inativar proteínas e alta concentração de sal para precipitar os exopolissacarídeos. Ele não usa fenol, clorofórmio nem álcool isoamílico durante o processo de extração de DNA. Ele também não requer liofilização do micélio e moagem usando nitrogênio líquido. Usando nosso método, uma quantidade suficiente de DNA puro (média A260: A280 = 1,91 ± 0,001) (média = 55,57 ± 0,002 ng/µl) foi obtida de 100 mg de micélio. O DNA foi passível de amplificação por PCR usando primers de repetição de sequência intersimples e primers visando a região espaçadora transcrita interna de S. rolfsii. Nosso método será muito útil em laboratórios que não têm acesso a nitrogênio líquido e instalações de liofilização e será um catalisador para estudos filogenéticos baseados em PCR desse importante patógeno do feijão comum.