Jornal de pesquisa e terapia com células-tronco

Abstrato

Um ensaio funcional para endoderma putativo de ratinho e humano definitivo usando culturas de embriões inteiros de pintos

Martina Johannesson, Henrik Semb, Palle Serup e Mattias Hansson

Introdução: As células estaminais embrionárias (ESCs) representam uma potencial fonte celular para o tratamento de doenças degenerativas, como a diabetes. Vários estudos abordaram a geração de endoderme definitivo (DE) a partir desta fonte celular, tentando recapitular os eventos de sinalização que ocorrem durante a embriogénese. No entanto, a diferenciação subsequente de DE não conseguiu gerar células beta produtoras de insulina funcionais. Para garantir que temos o material de partida correto, precisamos de caracterizar completamente o DE derivado do ESC, avaliando se as células são funcionalmente equivalentes à contraparte in vivo. Assim, o objetivo deste estudo é descrever um método pelo qual a funcionalidade in vivo do DE derivado do CES possa ser avaliada.

Métodos: Por diferenciação dirigida, o suposto DE foi derivado de CES humanas e de ratinho. Este suposto DE foi posteriormente transplantado para o endoderma de embriões de galinha para determinar qualquer ocorrência de integração. A DE putativa foi analisada pela expressão génica e proteica antes do transplante e 48 horas após o transplante.

Resultados: O suposto DE, derivado de CES de ratinhos e humanos, foi integrado com sucesso no endoderma do pinto. Os genes específicos da endoderme foram expressos no suposto DE antes da integração e as proteínas específicas da endoderme foram avaliadas 48 horas após o transplante.

Conclusões: Descrevemos o procedimento metodológico detalhado para o transplante de supostos DE derivados de CES e a subsequente análise da migração e desenvolvimento das células enxertadas. O nosso resultado mostra que o suposto DE se integra no endoderma do pinto e participa no desenvolvimento do intestino do frango, indicando a geração de DE funcional a partir dos CES. Este ensaio funcional pode ser utilizado para avaliar a geração de DE funcional derivado de CES humanos e de ratinho e fornece uma ferramenta valiosa para a caracterização celular. Este é um passo inicial importante no processo de diferenciação em direção a células beta totalmente funcionais.